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固相萃取仪另一个脱氧核

时间:2020-04-18   浏览:62  

"#$为模板催化脱氧多核苷酸链在 12 34端与固相萃取仪另一个脱氧核苷三磷酸的 52 !磷酸生成磷酸二酯键,从而延长多核苷酸链。因此,该酶又称为 "#$指 导的 "#$聚合酶("#$ .6+*78*. "#$ %&’()*+,-*,"""0)。此聚合反应需要二价阳离子( 9:; <),延长的 方向为 52!12。 (.#90) ! < .#/0% %%!(.#90) ! <= < 006 式中(.#90) 代表含有 !个脱氧核苷酸的 "#$片段,.#/0代表任何一种脱氧核苷三磷酸。 ! !!真核生物中有多种 "#$聚合酶,按其发现的先后顺序分别命名为 "#$聚合酶 !、"、#、$、%、&、’,和 (。 它们的分类及功能见表 =; ;。主要几种聚合酶的基本性质可归纳于表 =; 1。 表 !" "#真核细胞 $%&聚合酶的分类及功能 酶的名称功! !能! ! ! 0&’ !引物合成及后随链部分合成 0&’ "碱基切除修复 0&’ #线粒体 "#$复制 0&’ $主要复制酶 0&’ %不清楚,复制或修复 0&’ &损伤旁路修复 0&’ ’损伤旁路修复 0&’ (损伤旁路修复 表 !" ’#真核细胞几种主要 $%&聚合酶的性质 "#$聚合酶 蛋白质相对分子质量 细胞定位 相关连酶的活性 ! ! 12 !52外切酶 ! !引发酶 ! " # $ > ;5? @ =?1(1A B 1C)@ =?1(=A? B 1??)@ =?1 =D? @ =?1 核核线粒体核 无无有有 有无无无 % ;5A @ =?1 核 有 无 ! ! "

 

#$聚合酶 !和 $是 "#$复制的主要酶,前者参与 E#$引发及后随链的起始合成,后者是主要的复 制酶,它参与冈崎片段的延伸及前导链的合成。"#$聚合酶 "主要参与 "#$损伤的修复。"#$聚合酶 #参与线粒体 "#$的复制。 !!(二)引发酶 !!引发酶(%+6),-*)又称引物酶。在 "#$复制过程中,需要合成一小段 E#$引物( %+6)*+)。此 E#$引 物的碱基与 "#$模板是互补的,并为 "#$的合成提供游离的 12 34末端。催化此引物合成的酶称引发 酶,它以核苷三磷酸(#/0)为底物。在真核生物中,引发酶与 "#$聚合酶 !形成一个复合物,这个复合物 合成大约 =?个核苷酸长的 E#$引物,然后由引发酶活性转化为 "#$聚合酶活性,以 。#/0为底物合成大 约 =5 B1?个脱氧核苷酸以延长引物。 !!(三)拓扑异构酶 !!在复制过程中,"#$的超螺旋结构必须解开,拓扑异构酶( 8&%&6-&)*+,-*)能松弛超螺旋,使其有利于 复制。此酶能切断 "#$双链,使 "#$解旋、解链,变成松弛状态。并在适当时间又能连接磷

 

酸二酯键,将 "!!第三篇 !遗传信息的传递 切口封闭。人类有两种拓扑异构酶,分别为 !型和 "型。人类的 !型拓扑异构酶又称为缺口关闭酶 ! !),-.(’+ /’012/)此酶能切断 $%&双链中的一 (’()*(’+ , 股,在 $%&复制及转录过程中能解开正超螺旋及负超螺 旋。 "型拓扑异构酶能切断 $%&的两条链,并需要水解 &34。人的 "型拓扑异构酶不是一种旋转酶( +156./),为 此,它不能诱导负超螺旋生成。但是,它在终止阶段和染 色体的分离中起关键作用。它参与 $%&与核基质的特殊 部位的附着。 !!(四)解(螺)旋酶 !!在 $%&复制中以单链 $%&为模板,合成子代 $%&。 解旋酶(=/,()6./)能解开 $%&的双螺旋,其作用是在复制 叉前解开一小段 $%&。 !!(五)单链 $%&结合蛋白 !!单链 $%&结合蛋白(.(’+,/ .>56’? $%& @(’?(’+

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